細胞培養(yǎng)用的胰蛋白酶自己配置和買的試劑有什么區(qū)別？一般0.25%胰蛋白酶的用量是多少？
細胞培養(yǎng)用的胰蛋白酶自己配置和買的試劑有什么區(qū)別？一般0.25%胰蛋白酶的用量是多少？
1跟2、3的區(qū)別：酚紅，主要做指示劑用的，用來調(diào)節(jié)其PH，通過顏色可以觀察出，一般動物細胞傳代用的胰酶PH值在7.0~7.4之間。1、2跟3的區(qū)別：主要體現(xiàn)在EDTA上面，動物細胞表面很多和培養(yǎng)皿結(jié)合的蛋白都是帶有鈣或者鎂離子的蛋白，EDTA對鈣鎂離子有很好的螯合作用，這樣就可以更好的輔助胰酶降解相應(yīng)的蛋白質(zhì)，在消化效率上，會有很好提高，至于不含鈣鎂離子，這個，想想就知道了，溶液中含鈣鎂肯定會減弱其胰酶的活性的。
胰蛋白酶的介紹
中文名稱: 胰蛋白酶 中文同義詞: 胰蛋白酶;胰蛋白酶1：250（豬胰臟）;胰蛋白酶1：300（豬胰臟）;胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類 英文名稱: Trypsin 英文同義詞: TRYPSIN;TRYPSIN, 1-250;TRYPSIN, 1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN, HUMAN PANCREAS;TRYPSIN PORCINE;TRYPSIN, PORCINE PANCREAS;ec3.4.4.4 CAS號: 9002-07-7 分子式: C6H15O12P3 分子量: ≈24000 EINECS號: 232-650-8 胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有機溶劑。
在pH1.8時，短時間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護和激活作用，胰蛋白酶的等電點為pH10.1。
牛胰蛋白酶原有229個氨基酸組成，含6對二硫鍵，其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下，酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解，釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個，分子量23800 ，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸殘基排列順序中，只有41個氨基酸殘基不同，但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。
沉降系數(shù)S20W為2.77S，pI=10.8，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對酶的保護作用不及牛羊的明顯，無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵，斷裂1~2個鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。
羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。
除存在于脊椎動物外，還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動物的血液凝固和炎癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學(xué)結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認為這些酶是從共同的祖先酶在進化過程中分化而來的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同。
胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。***品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定按干燥品計算，每1mg 的效價不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。白色或米**結(jié)晶性粉末。
溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。分子量24 000，pI 10.5，最適pH值7.8～8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制劑對其活性有強烈抑制。
臨床用于抗炎消腫，工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。
細胞培養(yǎng)傳代常見問題
01 一般拿到細胞后，應(yīng)該注意什么? 收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。 02 何時須更換培養(yǎng)基? 視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2-3天更換培養(yǎng)基。
03 細胞何時進行傳代較好? 一般情況下細胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。
04 貼壁細胞如何進行傳代? 去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。 05 懸浮性細胞應(yīng)如何傳代處理? 一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補液時，需避免反復(fù)吹打。
06 貼壁細胞傳代如何使用胰酶? 一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時，易造成培養(yǎng)基中細胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化，對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化，細胞密度過高超過80%時，采用分步消化法。胰酶儲存在–20°C，解凍在4°C進行，**次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會。
07 如何控制胰酶消化時間? 胰酶消化的程度是細胞培養(yǎng)中的一個關(guān)鍵步驟：消化過度細胞碎片增多，黑渣子增多，細胞會成片脫落，嚴重影響細胞活性，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細胞活性。 不同細胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細胞的密度有關(guān)。
消化對于新購買的細胞，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間，可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓，記錄**消化時間，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。 08 細胞離心下來的離心速率應(yīng)為多少? 細胞傳代或凍存時欲回收細胞，其離心速度一般為800-1000 rpm/min，室溫離心5-8分鐘，轉(zhuǎn)速過高，將造成細胞破裂**。 09 如何區(qū)分活細胞和*細胞? 顯微鏡下觀察：活細胞中間透亮，飽滿，有光澤，*細胞較暗。
也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。 10 如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞? 用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000 個/毫升，在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞。活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是*細胞，注意計數(shù)需在加入臺盼藍10min內(nèi)完成。
有細胞計數(shù)儀的，可直接用計數(shù)儀進行。 11 二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎? 二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。 12 使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么? EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。
13 可否使用與原先不同的培養(yǎng)基? 不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，易造成細胞狀態(tài)不好，最終造成細胞無法存活。 [圖片上傳失敗…(image百科-efba9e-67)] 14 可否使用與原先不同的血清種類? 不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。
來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 15 細胞為何生長不均勻? 細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導(dǎo)致細胞生長不均勻。 16 購買的細胞**或細胞***不佳 研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)***不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。
血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。
冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為*細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久。
17 細胞抱團怎么處理? 一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易**并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。 18 細胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象? 部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐*株等)，這個是正?，F(xiàn)象。
如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。 19 細胞傳兩代后開始逐漸**的原因 很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太稀;或者生長較快的細胞，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長)。 [圖片上傳失敗…(image-bcf360-67)] 20 細胞生長逐漸變慢是什么原因? 細胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。 21 培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2? 一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。
當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細胞。 22 CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔? 定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。 23 細胞接種密度多少合適? 依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。
細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞，傳代比率1:6-1:12為。
胰酶簡介
目錄 1 拼音 2 英文參考 3 胰酶*典標(biāo)準(zhǔn) 3.1 品名 3.1.1 中文名 3.1.2 漢語拼音 3.1.3 英文名 3.2 來源含量 3.3 性狀 3.4 檢查 3.4.1 脂肪 3.4.2 干燥失重 3.4.3 微生物限度 3.5 效價測定 3.5.1 胰蛋白酶 3.5.1.1 對照品溶液的制備 3.5.1.2 供試品原液的制備 3.5.1.3 測定法 3.5.2 胰淀粉酶 3.5.2.1 供試品溶液的制備 3.5.2.2 測定法 3.5.3 胰脂肪酶 3.5.3.1 供試品溶液的制備 3.5.3.2 測定法 3.6 類別 3.7 貯藏 3.8 制劑 3.9 版本 4 胰酶說明書 4.1 *品名稱 4.2 英文名稱 4.3 胰酶的別名 4.4 分類 4.5 劑型 4.6 胰酶的*理作用 4.7 胰酶的*代動力學(xué) 4.8 胰酶的適應(yīng)證 4.9 胰酶的禁忌證 4.10 注意事項 4.11 胰酶的不良反應(yīng) 4.12 胰酶的用法用量 4.13 胰酶與其它*物的相互作用 4.14 專家點評 附： * 胰酶相關(guān)*品說明書其它版本 1 拼音 yí méi 2 英文參考 trypsogen pancreatic ferment pancreatin [湘雅醫(yī)學(xué)專業(yè)詞典] pancreatic enzyme朗道漢英字典] tryptic enzyme 3 胰酶*典標(biāo)準(zhǔn) 3.1 品名 3.1.1 中文名 胰酶 3.1.2 漢語拼音 Yimei 3.1.3 英文名 Pancreatin 3.2 來源含量 本品系自豬、羊或牛胰中提取的多種酶的混合物，主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶與胰脂肪酶。按干燥品計算，每1g中含胰蛋白酶活力不得少于600單位，胰淀粉酶活力不得少于7000單位，胰脂肪酶活力不得少于4000單位。
3.3 性狀 本品為類白色至微**的粉末;微臭，但無霉敗的臭氣;有引濕性;水溶液煮沸或遇酸即失去酶活力。
3.4 檢查 3.4.1 脂肪 取本品1.0g，置具塞錐形瓶中，加乙醚10ml，密塞，時時旋動，放置約2小時后，將乙醚液傾瀉至用乙醚濕潤的濾紙上，濾過，殘渣用乙醚10ml照上法處理，再用乙醚5ml洗滌殘渣，合并濾液及洗液至已恒重的蒸發(fā)皿中，使乙醚自然揮散后，在105℃干燥2小時，精密稱定，遺留脂肪不得過20mg。 3.4.2 干燥失重 取本品，在105℃干燥4小時，減失重量不得過5.0%（2010年版*典二部附錄Ⅷ L）。 3.4.3 微生物限度 取本品依法檢查（2010年版*典二部附錄Ⅺ J），每1g供試品中細菌數(shù)不得過10000個，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過100個。并不得檢出大腸埃希菌;每10g供試品中，不得檢出沙門菌。
3.5 效價測定 3.5.1 胰蛋白酶 3.5.1.1 對照品溶液的制備 取酪氨酸對照品，精密稱定，加0.2mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液。 3.5.1.2 供試品原液的制備 取本品約0.1g，精密稱定，置乳缽中，加冷至5℃以下的氯化鈣溶液（取氯化鈣1.47g，加水500ml使溶解，用0.1mol/L鹽酸溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0～6.2）少量，研磨均勻，置100ml量瓶中，加氯化鈣溶液至刻度，搖勻;精密量取適量，加入冷至5℃以下的硼酸鹽緩沖液（取硼砂2.85g、硼酸10.5g與氯化鈉2.50g，加水使溶解成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.5±0.1），定量稀釋制成每1ml中約含胰蛋白酶0.12單位的溶液。 3.5.1.3 測定法 取試管3支，分別精密量取供試品原液1ml與上述硼酸鹽緩沖液2ml，在40℃水浴中保溫10分鐘，分別精密加入在40℃水浴中預(yù)熱的酪蛋白溶液（取酪蛋白對照品1.5g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液13ml與水40ml，在60℃水浴中加熱使溶解，放冷，加水稀釋至100ml，調(diào)節(jié)pH值至8.0）5ml，搖勻，立即置40℃±0.5℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘，再各精密加入5%三氯醋酸溶液5ml終止反應(yīng)，混勻，濾過，取續(xù)濾液作供試品溶液;另精密量取供試品原液1ml，加上述硼酸鹽緩沖液2.0ml，在40℃水浴中保溫10分鐘，精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，搖勻，置40℃±0.5℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)30分鐘，立即精密加入酪蛋白溶液5ml，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作空白對照;照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄Ⅳ A），在275nm的波長處，測定并計算供試品溶液吸光度的平均值（）。
另用0.2mol/L鹽酸溶液作空白對照，在275nm的波長處測定對照品溶液的吸光度（As）。按下式計算： 每1g含胰蛋白酶活力（單位） 式中Ws為對照品溶液每1ml中含酪氨酸的量，μg; W為供試品取樣量，g; n為供試品的稀釋倍數(shù)（500）。 在上述條件下，每分鐘水解酪蛋白生成三氯醋酸不沉淀物（肽及氨基酸等）在275nm波長處與1μmol酪氨酸相當(dāng)?shù)拿噶?，?個胰蛋白酶活力的單位。
供試品溶液測得的值應(yīng)在0.15～0.6，否則應(yīng)調(diào)整濃度，另行測定。 3.5.2 胰淀粉酶 3.5.2.1 供試品溶液的制備 取本品約0.3g，精密稱定，置研缽中，加冷至5℃以下的磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀13.61g與磷酸氫二鈉35.80g，加水使溶解成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.8）少量，研磨均勻，加上述磷酸鹽緩沖液定量稀釋制成每1ml中約含胰淀粉酶10～20單位的溶液。 3.5.2.2 測定法 取1%可溶性淀粉溶液[取經(jīng)105℃干燥2小時的可溶性淀粉（供胰淀粉酶測定）1.0g，加水10ml，攪勻后，邊攪拌邊緩緩傾入100ml沸水中，繼續(xù)煮沸20分鐘，放冷，加水稀釋至100ml]25ml、上述磷酸鹽緩沖液10ml、1.2%氯化鈉溶液1ml與水20ml，置250ml碘瓶中，在40℃水浴中保溫10分鐘，精密加入供試品溶液1ml，搖勻，立即置40℃±0.5℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘，加1mol/L鹽酸溶液2ml終止反應(yīng)，搖勻，放至室溫后，精密加碘滴定液（0.05mol/L）l0ml，邊振搖邊滴加0.1mol/L氫氧化鈉溶液45ml，在暗處放置20分鐘，加硫酸溶液（1→4）4ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至無色。
另取1%可溶性淀粉溶液25ml、上述磷酸鹽緩沖液10ml、1.2%氯化鈉溶液1ml與水20ml，置碘瓶中，在40℃±0.5℃水浴中保溫10分鐘，放至室溫后，加1mol/L鹽酸溶液2ml，搖勻，加入供試品溶液1.0ml，搖勻，精密加入碘滴定液（0.05mol/L）10ml，邊振搖邊滴加0.1mol/L氫氧化鈉溶液45ml，在暗處放置20分鐘，加硫酸溶液（1→4）4ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至無色，作為空白對照，每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于9.008mg無水葡萄糖。按下式計算。 每1g含胰淀粉酶活力（單位） 式中A為供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液的容積，ml; B為空白消耗硫代硫酸鈉滴定液的容積，ml; F為硫代硫酸鈉滴定液的濃度（mol/L）換算值; W為供試品取樣量，g; n為供試品稀釋倍數(shù)（200）。 在上述條件下，每分鐘水解淀粉生成1μmol葡萄糖的酶量，為1個胰淀粉酶活力的單位。
（B—A）的硫代硫酸鈉滴定液應(yīng)為2.0～4.0ml，否則應(yīng)調(diào)整濃度，另行測定。 3.5.3 胰脂肪酶 3.5.3.1 供試品溶液的制備 取本品約0.1g，精密稱定，置乳缽中，加冷至5℃以下的三羥甲基氨基甲烷緩沖液（取三羥甲基氨基甲烷606mg，加0.1mol/L鹽酸溶液45.7ml，加水至100ml，搖勻，調(diào)節(jié)pH值至7.1）少量，研磨均勻，加上述緩沖液定量稀釋制成每1ml中約含胰脂肪酶8～16單位的溶液。 3.5.3.2 測定法 取橄欖油乳液（取橄欖油4ml與***膠7.5g，研磨均勻，緩緩加水研磨使成100ml，用高速組織搗碎機以每分鐘8000轉(zhuǎn)攪拌兩次，每次3分鐘，取乳劑在顯微鏡下檢查，90%乳粒的直徑應(yīng)在3μm以下，并不得有超過10μm的乳粒）25ml、牛膽鹽溶液[取牛膽鹽參照試劑適量，用水制成（2→25）的溶液]2ml與水10ml，置100ml燒杯中，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）調(diào)節(jié)pH值至9.0，在37℃±0.1℃水浴中保溫10分鐘，再調(diào)節(jié)pH值至9.0，精密量取供試品溶液1ml，在37℃±0.1℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘，同時用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定使反應(yīng)液的pH值恒定在9.0，記錄消耗氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的量（ml）。另取在水浴中煮沸15～30分鐘的上述供試品溶液1ml，照上述方法測定作空白對照，按下式計算。
每1g含有胰脂肪酶活力（單位） 式中A為供試品消耗氫氧化鈉滴定液的容積，ml; B為空白消耗氫氧化鈉滴定液的容積，ml; M為氫氧化鈉滴定液的濃度，mol/L; W為供試品取樣量，g; n為供試品稀釋倍數(shù)（50）。 在上述條件下，每分鐘水解脂肪（橄欖油）生成1μmol脂肪酸的酶量，為1個胰脂肪酶活力的單位。 平均每分鐘消耗的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的量應(yīng)為0.08～0.16ml，否則應(yīng)調(diào)整濃度，另行測定。 3.6 類別 助消化*。
3.7 貯藏 遮光，密封，在陰涼干燥處保存。 3.8 制劑 （1）胰酶腸溶片?（2）胰酶腸溶膠囊 3.9 版本 《中華******典》2010年版 4 胰酶說明書 4.1 *品名稱 胰酶 4.2 英文名稱 Pancreatin 4.3 胰酶的別名 得每通;消得良;胰酵素;胰腺酶;胰液素;胰消化素;胰酶腸溶微粒膠囊;Creon;Creon 10000;Licrease;Pancreatinum 4.4 分類 消化系統(tǒng)*物 > 助消化*物 4.5 劑型 1.片劑: 0.3g，0.5g; 2.腸溶膠囊：0.15g。 4.6 胰酶的*理作用 胰酶是從牛、豬或羊等動物的胰腺中得到的多種酶的混合物，主要含胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶等。
胰蛋白酶能使蛋白轉(zhuǎn)化為蛋白胨，胰淀粉酶使淀粉轉(zhuǎn)化為糊精與糖，胰脂肪酶則使脂肪分解為甘油和脂肪酸。胰酶在中性或弱堿性條件下活性較強，在腸液中可消化淀粉、蛋白質(zhì)及脂肪，從而起到促進消化和增進食欲的作用。 4.7 胰酶的*代動力學(xué) 據(jù)國外資料**，胰酶口服后30min起效，120～300min時達**效應(yīng)。
4.8 胰酶的適應(yīng)證 為助消化*，臨床主要用于各種原因引起的胰腺外分泌功能不足的替代治療。 4.9 胰酶的禁忌證 1.急性胰腺炎早期患者禁用。 2.對豬蛋白及其制品過敏者禁用。 4.10 注意事項 1.服用此*的患者需補充葉酸鹽。
2.服用時不可嚼碎。 4.11 胰酶的不良反應(yīng) 胰酶可引起頰部及 *** 周圍痛及消化道的任何部位出血，偶見過敏反應(yīng)，可有打噴嚏、流淚、皮疹、鼻炎和支氣管哮喘等。囊性纖維化的患者應(yīng)用胰酶治療，可見尿中尿酸增多，且與劑量相關(guān)。
此外，胰酶制劑常被沙門菌屬污染，雖不影響酶的活性，但可使人感染。 4.12 胰酶的用法用量 每次0.3～1g，每天3次，餐前服。 4.13 *物相互作用 1.胰酶與等量碳酸氫鈉同服可增強療效。 2.西咪替丁能抑制胃酸分泌，增加胃和十二指腸內(nèi)的pH值，故能防止胰酶失活，增強口服胰酶的療效。
其作用較口服堿性*物為佳。因為所有的H2受體拮抗*均可降低胃內(nèi)酸度，故推測雷尼替丁、法莫替丁、尼扎替丁等與胰酶也存在此相互作用。合用時可能需要減少胰酶劑量。
3.胰酶在酸性溶液中活性減弱，甚至被分解滅活，故忌與稀鹽酸等酸性*物同服。 4.胰酶與阿卡波糖合用時，后者的*效降低，故應(yīng)避免同時使用。 5.胰酶與米?。
