簡述革蘭氏染色的原理

簡述革蘭氏染色的原理

革蘭氏染色法，是將所有細菌區(qū)分為革蘭氏陰性菌（G-）和革蘭氏陽性菌（G+）兩大類，是細菌學中最為常用的鑒別染色法。這種染色的方法能夠將細菌分為陰性和陽性，主要認為革蘭氏顏色染色是基于細菌細胞壁特殊化學組分進行染色的。

染色原理，主要是通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細菌細胞壁內形了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，隨后再用95%的乙醇進行脫色即可。

革蘭氏染色法，是指細菌學中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法，這種染色法是由丹麥的醫(yī)生革蘭氏于1884年所發(fā)明的，最初其是用來鑒別肺炎球菌與克雷伯肺炎菌。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色及復染等四個步驟。未經過染色的細菌，由于其周圍的環(huán)境折光率差別較小，故在顯微鏡下難以進行區(qū)分。但是，只要經過染色后，陽性菌會呈現出紫色，陰性菌呈現的則是紅色，并且還能夠清楚的看到細菌的形態(tài)，排列及其某些結構的特征，從而可以輕松地進行分類鑒定。

革蘭染色的原理

革蘭氏染色原理是細菌對于革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。
革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網狀結構組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由于脫水而引起網狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫一碘復合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現藍紫色。

革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫一碘復合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復染液（番紅）的顏色，因此呈現紅色。

革蘭氏染色的步驟
細菌經過堿性燃料結晶紫染色，后經過碘液進行媒染，然后用酒精脫色，在一定的條件下，有的細菌媒染后，顏色不被脫去，有的會被脫去，因此會把細菌分成兩類，不被脫去的被稱為革蘭氏陽性菌，脫去的則被稱之為革蘭氏陰性菌。
脫色后可以在用紅色染料進行復染，陽性菌是紫色，陰性菌則被重新染上了紅色。很多有芽孢的桿菌和大部分的球菌，還有放射菌以及真菌杜輝呈現革蘭氏正反應，而弧菌、螺旋體以及大多數的致病性無芽孢桿菌則呈現出副反應。

革蘭氏染色法的原理是什么

革蘭氏染色法的原理是細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性屏障當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結晶紫-碘復合物在細胞膜上，呈紫色。肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘復合物溶出細胞壁，番紅染液復染后呈紅色。

革蘭氏染色法的原理

革蘭染色法是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立，直到現今，革蘭氏染色法仍是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。細菌先經堿性染料結晶紫染色，而后經碘液進行媒染，之后用酒精脫色，在一定條件下有的細菌媒染后的顏色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G-)。

為方便進一步觀察，脫色后可再用一種紅色染料如堿性番紅等進行復染。

陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被重新染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數的球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應;弧菌、螺旋體和大多數致病性的無芽孢桿菌都呈現負反應。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學組成和生理性質上有很多差別，染色反應不一樣?，F在一般認為革蘭氏陽性菌體內含有特殊的**白質鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。

另外，陽性菌菌體等電點較陰性菌為低，在相同pH條件下進行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時的染色液pH和染色時間等條件要嚴格控制。例如，在強堿的條件下進行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應; pH很低時，則都可呈負反應。

此外，兩類菌的細胞壁等對結晶紫-碘復合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時間、脫色方法也應嚴格控制。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是： (一)涂片固定在干凈的載玻片**滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)進行無菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。

為避免因菌數過多聚集成團，不利于觀察細菌個體形態(tài)，可在載玻片一側進行上述操作，而在另一側再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環(huán)于此水滴中進行稀釋，涂布成薄層。若材料為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物中洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片上即可，如菌液濃度較大，也可使用水滴再進行一次稀釋。涂片**在室溫條件下使其自然干燥，有時為了使之干得更快些，可將標本面向上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈火焰上方較高的位置微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。

標本干燥后即進行固定，固定的目的有三個：(1)殺*微生物，固定細胞結構。(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上，防止標本水洗時被水沖洗掉。(3)改變染料對細胞的通透性，因為*的原生質比活的原生質易于染色。固定常常利用高溫，手執(zhí)載玻片的一端(涂有標本的遠端),標本向上，在酒精燈火焰外層盡快的百科來回通過3-4次，共約2s-3s,并不時以載玻片背面加熱，載玻片背面觸皮膚，以不覺過燙為宜(不超過60℃),待放置冷后，再進行染色。

（二)染色在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結晶紫染液，染色液應完全覆蓋整個菌膜，染色1min。(三)水洗染色到一定的時間，拿住玻片使之成450角，用細小的水流把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。(四)媒染加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時，媒染劑與染料形成不溶性的化合物，可增加染料和細菌的親和力。

(五)水洗，用吸水紙吸去水分用細小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。(六)脫色加95%酒精數滴，并輕輕搖動進行脫色， 20 s~30 s后再進行水洗，吸去水分。(七)復染蕃紅染色液染色10 s后， 自來水沖洗。(八)干燥，鏡檢染色的結果，革蘭氏正反應菌體都呈紫色，負反應菌體都呈紅色。

革蘭染色法的原理是什么

早在十九世紀丹麥的醫(yī)生就創(chuàng)立了革蘭染色法，到現在為止，革蘭染色法廣泛被用來做鑒別的一種染色方法。那么革蘭氏染色法的基本原理是什么呢?
細菌經過堿性燃料結晶紫染色，后經過碘液進行媒染，然后用酒精脫色，在一定的條件下，有的細菌媒染后，顏色不被脫去，有的會被脫去，因此會把細菌分成兩類，不被脫去的被稱為革蘭氏陽性菌，脫去的則被稱之為革蘭氏陰性菌。

脫色后可以在用紅色染料進行復染，陽性菌是紫色，陰性菌則被重新染上了紅色。

很多有芽孢的桿菌和大部分的球菌，還有放射菌以及真菌杜輝呈現革蘭氏正反應，而弧菌、螺旋體以及大多數的致病性無芽孢桿菌則呈現出副反應。革蘭氏染色法的原理是革蘭氏陽性菌和陰性菌在化學和生理性質上差別比較大，染色體的反應也不一樣，一般陽性菌和碘和結晶紫的復合物結合比較牢固，不容易脫色，而陰性菌的結合相對比較弱，容易脫色，這是導致染色反應的主要依據。

革蘭氏染色的原理是什么?他是怎么把革蘭氏陽性菌和陰性均染成不同顏色 的?

革蘭氏染色原理是通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌遇乙醇或丙酮脫色處理時，不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌在遇脫色劑后，呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。其中，染色的差異主要是陰性與陽性細菌細胞壁的差異所引起的。