正在做細(xì)胞的三維培養(yǎng)，用的是BD公司的I型膠原和matrix gel膠，但怎么不凝啊？
正在做細(xì)胞的三維培養(yǎng)，用的是BD公司的I型膠原和matrix gel膠，但怎么不凝??？
博凌科為解答：沒有用過BD公司的百科膠原，但使用過Sigma的I型膠原(固體)，一般是自己配制成液態(tài)，然后根據(jù)需要按一定比例添加10x濃縮培養(yǎng)基及血清(保證 細(xì)胞的營養(yǎng))，用1M濃度的NaOH調(diào)節(jié)pH值約7.2，再和細(xì)胞混合均勻后添加到培養(yǎng)器皿中，直接放到37度培養(yǎng)箱，一般也就是30分鐘左右即可凝固， 等完全凝固后，再在其上添加培養(yǎng)基。膠凝固后，由于其內(nèi)添加了培養(yǎng)基，所以一般是粉色的。
另外，你在添加NaOH及培養(yǎng)基后，測(cè)沒測(cè)過膠原的pH值？再者會(huì)不會(huì)在膠原中添加培養(yǎng)基量太多？培養(yǎng)基占的比例大，也會(huì)影響到膠原凝固。
什么是基質(zhì)膠
基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，還包含生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。
在室溫條件下，Matrigel聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。
擴(kuò)展資料：
注意事項(xiàng)：
1、基質(zhì)膠在22-35℃能夠快速成膠。
為了保證Matrixgel基質(zhì)的成膠性能與穩(wěn)定性，最終稀釋濃度不應(yīng)低于3 mg/ml（Matrixgel原液的濃度因批次不同有差異）?？捎脽o血清培養(yǎng)基來稀釋Matrixgel，稀釋后需要立即使用。
2、融化后，用預(yù)冷的槍頭混勻Matrixgel基質(zhì)。
3、將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，按50μL/cm2生長(zhǎng)面積的濃度加入Matrixgel基質(zhì)。
4、在37℃放置30分鐘，此時(shí)平板即可使用。
基質(zhì)膠為什么容易凝固
基質(zhì)膠容易凝固是填加了很多溶劑。由兩部分組成，一部分是易揮發(fā)的溶劑(對(duì)于普通膠水溶劑多是水，特殊膠水另有配方)，一部分是真正起粘合作用的粘合劑.將膠水涂在物體上時(shí)，溶劑會(huì)揮發(fā)掉，粘合劑會(huì)將兩部分物體結(jié)合起來.在溶劑揮發(fā)掉之前，粘結(jié)是不牢固的，很容易就可以將兩部分分開.在膠水瓶里的膠水由于瓶蓋阻止了溶劑的揮發(fā)，所以不會(huì)粘結(jié)凝固。
