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電泳里的支持介質(zhì)有么用？

電泳可分為：(1)紙電泳;(2)醋酸纖維素電泳;(3)瓊脂凝膠電泳;(4)聚丙烯酰胺凝膠電泳;(5) SDS-PAGE。電泳是一種方法，其中帶電樣品(蛋白質(zhì)、核苷酸等。)在惰性支持介質(zhì)(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中游動(dòng)。)在電場的作用下在相應(yīng)電極的方向上以它們各自的速度移動(dòng)，從而將組分分離成窄條帶，并記錄電泳條帶或通過合適的檢測方法計(jì)算百分含量。

常用的pH梯度支持介質(zhì)有聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠和葡聚糖凝膠，其中最常用的是聚丙烯酰胺凝膠。

電泳處理是什么

電泳電泳的基本原理是指帶電粒子在電場作用下遷移的過程。許多重要的生物分子，如氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等。具有可電離的基團(tuán)，在一定的pH值下可以帶正電或負(fù)電。在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向電極移動(dòng)，其極性與其攜帶的電荷相反。

電泳技術(shù)是一種由于待分離樣品中各種分子的帶電性質(zhì)以及分子本身的大小和形狀的差異，利用帶電分子的不同遷移速度來分離、鑒定或純化樣品的技術(shù)。

電泳必須在支持介質(zhì)中進(jìn)行。Tiselius等人在1937年進(jìn)行的自由界面電泳沒有固定的支持介質(zhì)，因此擴(kuò)散和對(duì)流強(qiáng)烈，影響分離效果。于是出現(xiàn)了固定支持介質(zhì)電泳，樣品在固定介質(zhì)中電泳，減少了擴(kuò)散、對(duì)流等干擾效應(yīng)。最初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜，但這些介質(zhì)目前在實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)較少使用。

長期以來，小分子物質(zhì)如氨基酸、肽、糖等。通常以濾紙或纖維素和硅膠薄層板為介質(zhì)，通過電泳進(jìn)行分離和分析，但目前通常使用更靈敏的技術(shù)如HPLC進(jìn)行分析。這些介質(zhì)適用于分離小分子物質(zhì)，操作簡單方便。但對(duì)于復(fù)雜的生物大分子，分離效果較差。

凝膠作為支撐介質(zhì)的引入極大地促進(jìn)了電泳技術(shù)的發(fā)展，使電泳技術(shù)成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初用的是淀粉凝膠，但目前最常用的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。

電泳裝置主要包括電源和電泳槽兩部分。電源提供直流電，直流電在電泳槽內(nèi)產(chǎn)生電場，驅(qū)動(dòng)帶電分子遷移。電泳槽可分為臥式和立式。

垂直板電泳是一種常用的方法，常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間夾著兩塊玻璃板。玻璃板的兩側(cè)由塑料條隔開。在玻璃板的中間制備電泳凝膠。凝膠尺寸通常為12 cm 14 cm，厚度為1 mm ~ 2 mm，近年新開發(fā)的電泳槽膠面更小更薄，以節(jié)省試劑，縮短電泳時(shí)間。制膠時(shí)，將塑料梳子放入凝膠溶液中，待膠聚合形成樣品的凹槽后取出。水平電泳，將凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上，用一層薄薄的濕濾紙將凝膠與電泳緩沖液連接，或者將凝膠直接浸入緩沖液中。

因?yàn)閜H的變化會(huì)引起帶電分子電荷的變化，進(jìn)而影響電泳遷移的速度，所以電泳過程要在合適的緩沖液中進(jìn)行，這樣可以保持待分離物體的帶電性質(zhì)穩(wěn)定。

sds-page電泳分離蛋白質(zhì)的原理，這種方法為什么可以測定蛋白質(zhì)分子量

因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是用生化的方法提取的，所以蛋白質(zhì)是帶電的，就是基于蛋白質(zhì)PI用不同的等電聚焦對(duì)混合樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行聚焦。電泳時(shí)，正極和負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，向電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。

在外加電場的作用下，帶點(diǎn)的粒子會(huì)向電性相反的電極移動(dòng)，這就是所謂的電泳。

電泳技術(shù)可用于分析、分離和制備生物分子，例如氨基酸、肽、蛋白質(zhì)和核苷酸。

區(qū)帶電泳是由于在支持物上通過電泳將蛋白質(zhì)混合物分成幾個(gè)區(qū)帶。

擴(kuò)展信息：

膠體有電泳現(xiàn)象，證明膠體的顆粒帶電。各種膠粒性質(zhì)不同，吸收的離子不同，所以帶的電荷也不同。

在一定的支持物上，在均勻的載體電解質(zhì)中，樣品被加到中間位置。在電場的作用下，樣品中帶正電或負(fù)電的離子以不同的速度向負(fù)極或正極移動(dòng)，并被分離成單獨(dú)的區(qū)域。

根據(jù)支持物物理性質(zhì)的不同，區(qū)帶電泳可分為紙和其他纖維膜電泳、粉末電泳、凝膠電泳和絲線電泳。

蛋白電泳原理

混合蛋白質(zhì)電泳分離的基本原理是根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的不同，即酸堿性質(zhì)的不同來分離蛋白質(zhì)混合物。電泳：在外加電場的作用下，帶點(diǎn)的粒子會(huì)向與其電性相反的電極移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為電泳。

電泳技術(shù)可用于分析和分離生物分子，如氨基酸、肽、蛋白質(zhì)和核苷酸。

和制備。

區(qū)帶電泳是由于在支持物上電泳蛋白質(zhì)混合物被分離為若干區(qū)帶。電泳前用緩沖液浸潤薄膜或?yàn)V紙等支持物或用緩沖液直接配置成凝膠，將待分離的蛋白質(zhì)樣品加在它的一端或**，支持物的兩端與電極連接，通電電泳。電泳完畢，各個(gè)組分分布在不同的區(qū)域，用顯色劑（蛋白質(zhì)可用考馬斯亮藍(lán)或氨基黑等染色）顯色后可以顯示出各個(gè)組分。氨基酸混合物特別是寡聚核苷酸混合物一次電泳往往不能完全分開。

這種情況可以將第一次電泳分開的斑點(diǎn)通過支持介質(zhì)間的接觸印跡轉(zhuǎn)移到第二個(gè)支持介質(zhì)上，旋轉(zhuǎn)90°，進(jìn)行第二次電泳。這種方法稱為雙向電泳。聚丙烯酰胺凝膠電泳：以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，一般制成凝膠柱或凝膠板，凝膠是由相連的兩部分組成（小的部分是濃縮膠，大的部分為分離膠），這兩部分凝膠的濃度、緩沖液組分和離子強(qiáng)度、pH以及電場強(qiáng)度都是不同的，即不連續(xù)性。

電泳時(shí)樣品首先在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區(qū)帶，然后再進(jìn)行電泳分離。電泳有三種物理效應(yīng)：1、樣品的濃度效應(yīng);2、凝膠對(duì)被分離分子的篩選效應(yīng);3、一般電泳分離的電荷效應(yīng)。毛細(xì)管電泳：高效毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管區(qū)帶電泳、自由溶液毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管電泳，可分離氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、DNA片段和核酸以及多種小分子，也可用于手性化合物的分離。

等點(diǎn)聚焦（IEF）分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯度的介質(zhì)（如濃蔗糖溶液）中進(jìn)行。在外電場作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點(diǎn)的梯度處，并形成一個(gè)很窄的區(qū)帶。pH梯度制作一般利用兩性電解質(zhì)，它是脂肪族多胺和多羧類的同系物，它們具有相近但不相同的解離常數(shù)和等電點(diǎn)。

在外電場作用下，自然形成pH梯度。層析聚焦：根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異分離蛋白質(zhì)混合物的柱層析方法。